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1939年初，日寇占领两广，留守坚持作战的东江纵队组建了一支城市行动队。这支部队它的战场不在高山和原野，而在光怪陆离的都市。行动队的队员们各个身怀绝技，本领不同。有出身日本军校，擅长各种枪械的队长祈中垒，绰号“中尉”；也有出身大户人家，擅长轻功手雷夺命飞刀的梅彦芳，绰号“一剪梅”；还有忠诚木讷，功夫了得的北方帅哥马振奎，绰号“拐子马”；另有擅长爆破，专治各种不服的的马振奎妹妹马兰兰，绰号“蓝凤凰”；以及风情万种、擅长信息刺探的雷秀梓，绰号“九岁红”和巧舌如簧、擅长化妆套取情报的刘相林，绰号“刘公子”。他们这个小组就行像古时的剑客，总是潜入敌人的心脏，给日寇以沉重的一击。
故事发生在抗日战争初期。国军中校马烽（宋佳伦 饰）奉命组建“025敢死队”，以伺机袭击南京城内的日寇，他从被即将行刑的死囚中挑选了五个他认为合格的队员，他们是苏维埃政府军械部长麻老五（韩童生 饰）、中情局特工徐飞虎（杨猛 饰）、飞贼唐人杰（郭铁城 饰）、以及强大龙（铁鹤 饰）和朱大山。经过严格布置后，马烽带他们进入日寇铁蹄下的南京城，成功营救出两名援华的美国医生，并保护了他们所拍摄的南京大屠杀胶片。之后，他们冒着极大风险，成功刺杀日军驻南京最高指挥官熊本连太郎，并夺回国宝——传国玉玺。最后，他们为给殉难的三十万同胞复仇，决定在日军高官开会时与敌人同归于尽……
